Professor Layton en de Melodie van het Spook is het vierde spel van de Professor Layton serie. Het is het eerste spel van de tweede trilogie, die zich 3 jaar voor de gebeurtenissen van Professor Layton and the Curious Village afspeelt. Het spel volgt op Professor Layton en de Verloren Toekomst en wordt opgevolgd door Professor Layton en het Masker der Wonderen.
Professor Layton krijgt een brief van zijn oude vriend Clark Triton waarin beschreven wordt dat zijn dorpje aangevallen wordt door een geheimzinnig wezen. Samen met zijn assistent Emmy Altava trekt hij er op uit om dit mysterie op te lossen.